引言   

近來全國性寒潮席卷我國大部分地區(qū)。氣溫驟降、天氣多變的情況下，免疫力較弱的群體患病風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。多地疾控部門近期接連發(fā)布健康提示，輪狀病毒、諾如病毒、札如病毒、星狀病毒、腸道病毒等多種病原體引發(fā)的感染性腹瀉，已正式進(jìn)入發(fā)病高峰期。

而病毒的快速變異與復(fù)雜進(jìn)化讓精準(zhǔn)獲取全基因組成為診斷與防控的核心難題。已知諾如病毒包含GI-GX共10群40余種型別，輪狀病毒有A-H 8個(gè)群(人易感 A/B/C )，腺病毒共A-G 7個(gè)亞屬，110多個(gè)基因型別，這些病毒不僅亞型繁多，還存在頻繁的重組與新發(fā)突變，而傳統(tǒng)檢測(cè)僅能覆蓋少數(shù)常見型別。擴(kuò)增子富集法依賴特異性引物，僅能擴(kuò)增已知片段，面對(duì)多亞型共存或輪狀病毒這類分段基因組時(shí)，極易丟失關(guān)鍵序列，導(dǎo)致基因組組裝碎片化；同時(shí)，該方法對(duì)于罕見型別、新發(fā)變異株往往難以識(shí)別或漏檢，漏檢的變異株可能更具毒性、傳播力或免疫逃逸能力，但是容易被忽視，如C組輪狀病毒全球病例不足1%，但是香港已有報(bào)道C組輪狀病毒致死病例。

液相雜交捕獲技術(shù)恰好破解了這一困局：通過設(shè)計(jì)覆蓋目標(biāo)病毒全基因組的探針庫，經(jīng)生物素標(biāo)記的探針與靶標(biāo)區(qū)域特異性結(jié)合后，再借助鏈霉親和素磁珠對(duì)探針捕獲的目的片段進(jìn)行富集。無論病毒如何變異，只要其序列與探針存在一定程度的互補(bǔ)性，就能被有效捕獲，確保獲得完整的基因組信息，這對(duì)于研究病毒的進(jìn)化，監(jiān)測(cè)罕見/新發(fā)變異株的出現(xiàn)至關(guān)重要。

伯杰推出基于液相雜交捕獲原理，對(duì)常見的腹瀉類病原，例如輪狀病毒、諾如病毒、札如病毒、星狀病毒、腺病毒等全基因組的富集試劑盒，捕獲后的文庫可直接進(jìn)行 Illumina 平臺(tái)或MGI平臺(tái)測(cè)序。

實(shí)驗(yàn)流程示意圖

√ 全基因組高覆蓋：病毒全基因組序列覆蓋度≥99%，確?；蚪M關(guān)鍵信息無遺漏；

√ 新發(fā)變異強(qiáng)適配：針對(duì)病毒新發(fā)變異株仍能高效富集全基因組，精準(zhǔn)追蹤變異動(dòng)態(tài)；

√ 多平臺(tái)無縫兼容：封閉液與擴(kuò)增引物已完成多平臺(tái)預(yù)混處理，可直接適配 Illumina TruSeq文庫、華大單端 Barcode 文庫及華大雙端 Barcode 文庫的靶向捕獲實(shí)驗(yàn)；

√ 多病毒同步捕獲：可同步富集多種目標(biāo)病毒核酸，無需分批次實(shí)驗(yàn)。

對(duì)諾如病毒樣本，使用二代測(cè)序平臺(tái)，PE150讀長，測(cè)300Mb數(shù)據(jù)量，分析樣本基因組覆蓋度≥99.99%，覆蓋度結(jié)果如下：

對(duì)札如病毒樣本，使用二代測(cè)序平臺(tái)，PE150讀長，測(cè)300Mb數(shù)據(jù)量，分析樣本基因組覆蓋度≥99.8%，覆蓋度結(jié)果如下：

對(duì)腺病毒樣本，使用二代測(cè)序平臺(tái)，PE150讀長，測(cè)300Mb數(shù)據(jù)量，分析樣本基因組覆蓋度≥99.87%，覆蓋度結(jié)果如下：